(Urgent!) Culture Cellulaire D'insectes Et L'influence Du Cadmium (Cdcl2) Et Sérum (Svf)

[longicorne]

bonjour a tous j'ai besoin d'aide

travaux pratique sur l'utilisation d'une culture cellulaire d'insectes

l'ensemble sera réalisée sur des cellules s2, lignée cellulaire d'insectes.

ces cellules se cultivent en milieu schneider et nécessitent un passage (repiquage) au 1/10 toutes les 4 jours

objectif tp

déterminer et comparer in vitro l'influence du cadmium (cdcl2= chloride de cadmium) et serum (svf= serum foetal de veau) sur la croissance et la viabilité des cellules s2

-2 plaques de culture 6puit pour tester les effets de la concentration du svf et du cdcl2

plaque svf(%): 0, 1, 2, 5, 10, 20

plaque cdcl2(microM) avec10% de svf: 0microM, 10, 50, 100, 200

protocole

1er jours 12 avril

ensemencement cellulaire

a- décollement cellulaire

enlever milieu de culture du flask et le remplacer par 5ml de milieu de schneider

décoler les cellules

b-comptage cellulaire

utilisation une cellule de malassez pour comptage

homogeneiser et prelever (100microlitre) de (milieu+cellule) et mettre dans cellule de malassez

comptage sur 25 carreaux

determiner le titre de la suspension cell (cellules/ml) sachant qu'un carreau a un volume de 10^-5ml

c-ensemencement des plaques après préparation de la suspension cellulaire pour 2 binomes:

solution, concentration en svf (%), svf(microlitre ou ml), milieu schneider(ml)

SA, 0%(svf%), 0microlitre(svf microlitre ou ml), 2.5ml(schneider)

SB,2%(svf%),50microlitre (svf microL ou ml),2.47ml (schneider)

SC,4%,100microlitre,2.4ml

SD,10%,250microlitre,2.25ml

SE,20%,3.2ml,12.8ml

SF,40%,1.2ml,1.8ml

-pour la plaque svf:ajouter à chaque puits 1ml d'une solution de svf préparées pour obtenir la concentration final de svf à tester (réalisation dilution 1/2)

-pour plaque cdcl2: ajouter dans touts les puits la solution SE (dilution 1/2)

-refermer les plaques svf et cdcl2 et placer dans incubateur à 27°C pour 1 semaine

jeudi 18avril réalisé par prof: supplémentation en cadmium (228.36g/mol)

vendredi 19 avril

comptage et viabilité cellulaire

plaque svf, nbr tot de cellules, nbr de cellulues vivantes, nbr de cellules mortes

puits1-0%

puits2-1%

puits3-2%

puits4-5%

puits5-10%

puits6-20%

plaque cdcl2, nbr tot de cell, nbr de cell vivante, nbr de cell morte

puits1-0microM

puits2-10microM

puits3-20

puits4-50

puits5-100

puits6-200

décoller donc les cellules par des jets de milieu sur tapis cell

prélever et transfere 100 microlitre de solution cell de chaque puits et ajouter 100 microlitre de bleu de trypan et 350microlitre de PBS

le bleu de trypan pert de voir si il y a coloration en bleu que la cellule et morte

realisation comptage cellulaire à l'aide de la cellule de malassez

resultat

(les resultats montre que les cell avec du svf seul vivent, il y a augmentation du nb de cellule/ml et pour le pourcentage de mort avec concentration qui augmente, il baise

pour cdcl2 il semble y avoir une stagnation du nb de cell par ml pas vraiment de croisance mais le pourcentage de mort augment avec concentration qui augmente

donc voici mes question ou j'ai besoin d'aide

j'aurais voulus savoir, si vous saviez:

(c'est surtout pour les questions 1 et 2 que j'ai besoin d'aide)

1-quels sont les différents intérêts d'utilisés des tests de croissance et viabilité cellulaire (comme celui-ci dans notre protocole ou dans d'autre expériences) ?

2-dans quels autres types d'études peut-être envisageable avec ce modèle (culture cellulaire d'insectes car on utilise celui-ci dans notre expérience, je pense que c'est celui ci le modèle ) il faut donner plusieurs possibilités

(pour question 3 et 4 que si vous savez me répondre)

3-que contient le milieu de schneider ou qui est-il et pourquoi utilise t-on celui-ci pour faire pousser les cellules S2?.

4-que sont les cellules S2 (tout ce que je sait ce sont des cellules embryonnaires de drosophile) et pourquoi utiliser celle ci?

merci de l'aide qu'on pourrait m'apporter